FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 - PowerPoint Presentation

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 CÓDIGO: SGC.DI.260 VERSIÓN: 1.0 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍATRABAJO DE TITULACIÓN, PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE INGENIERO EN BIOTECNOLOGÍA“DETERMINACIÓN DEL CARIOTIPO DEL BABACO (Vasconcellea × heilbornii ‘Babaco’ (v. M. Badillo) v. m. Badillo)” Elaborado porESTRELLA ESPINOZA, HERNÁN ALEJANDRO DirectorLIC. SEGOVIA SALCEDO, MARÍA CLAUDIA M.SC Ph.D. SANGOLQUÍ 2019

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 CONTENIDO

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 JUSTIFICACIÓNProducido para consumo internoPotencial de exportación

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 FAMILIA CARICACEAE INTRODUCCIÓN

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA INTRODUCCIÓNFuente: (Ming y Moore, 2014)1 especie2-5 especies6-9 especies>10 especies

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 IMPORTANCIA ECONÓMICA> 10 millones de toneladas anualesIndustria alimenticia y farmacéutica INTRODUCCIÓN

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 INTRODUCCIÓN IMPORTANCIA ECONÓMICA DEL BABACO 225 T/ha durante período de producción (2 años)625 T/año Conservas, mermeladas, licores, jugo, fresco E nzimas con mayor actividad proteolítica Fuente: (M edina, 2005), (Rodríguez, 2013)

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260GÉNERO VASCONCELLEA16 especies Género relativamente nuevo Papayas de montaña 21 especies reportadas 1 híbrido INTRODUCCIÓN F uente: (Scheldeman et al., 2006 )

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 ORIGEN DEL BABACO Jigacho (V. stipulata)Chamburo (V. pubescens) Babaco (V. × heilbornii ) INTRODUCCIÓN

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 INTRODUCCIÓN DESCRIPCIÓN DEL BABACO

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 DESCRIPCIÓN DEL BABACO Condición ambientalRango Altitud 800 - 2600 mTemperatura 15 - 20 oCHumedad relativa 60 - 80% P recipitación 500 - 1500 mm/año pH 5.8 - 8.2 INTRODUCCIÓN

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 CITOGENÉTICA INTRODUCCIÓN Citogenética

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 CITOGENÉTICA EN PLANTAS INTRODUCCIÓNMeristemos radiculares Polen

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 Objetivo general Determinar el cariotipo del babaco (Vasconcellea × heilbornii ‘Babaco’ (V.M. Badillo) V.M. Badillo).OBJETIVOS

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 Objetivos específicos Determinar un protocolo para la observación de cromosomas en Vasconcellea × heilbornii. Determinar el número cromosómico de Vasconcellea × heilbornii mediante observación por microscopía óptica.Medir la longitud total y de los brazos de los cromosomas para su clasificación. OBJETIVOS

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 MATERIALES Y MÉTODOS PASOS GENERALES PARA LA OBSERVACIÓN DE CROMOSOMAS EN PLANTAS D etener la división celularC onservar la estructura celular C olorear los cromosomas

FECHA ÚLTIMA REVISIÓN: 13/12/11 VERSIÓN: 1.0 CÓDIGO: SGC.DI.260 MATERIALES Y MÉTODOS ESTANDARIZACIÓN DEL PROTOCOLO P retratamiento F ijación T ratamiento enzimático T inción

ESTANDARIZACIÓN DE PROTOCOLO MATERIALES Y MÉTODOS 1 2 3 4 No se distinguen cromosomas C romosomas difusos C romosomas claros C romosomas nítidos

HORA DE RECOLECCIÓN DE RAÍCES MATERIALES Y MÉTODOS

C ÁLCULO DE NÚMERO CROMOSÓMICO MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES Y MÉTODOS CARACTERIZACIÓN DE CROMOSOMAS

ESTANDARIZACIÓN DE PROTOCOLO RESULTADOS Y DISCUSIÓN

ESTANDARIZACIÓN DE PROTOCOLO RESULTADOS Y DISCUSIÓN G rupo A Grupo BGrupo CGrupo DGrupo E****

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

PROTOCOLO ESTANDARIZADO RESULTADOS Y DISCUSIÓN

E tanol-ácido acético E tanol-ácido propiónico DIFERENCIAS ENTRE REACTIVOS UTILIZADOS RESULTADOS Y DISCUSIÓN

A ceto-orceína RESULTADOS Y DISCUSIÓN DIFERENCIAS ENTRE REACTIVOS UTILIZADOS A ceto -carmín

HORA DE RECOLECCIÓN DE RAÍCES RESULTADOS Y DISCUSIÓN

CÁLCULO DE NÚMERO CROMOSÓMICO Repeticiones 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Número de cromosomas 17 18 18 18 18 18 18 17 17 18 18 18 18 18 18 Repeticiones 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Número de cromosomas 17 17 17 18 18 18 17 17 18 17 18 17 17 18 18 M edia = 17.63 2n = 18 RESULTADOS Y DISCUSIÓN

CÁLCULO DE NÚMERO CROMOSÓMICO RESULTADOS Y DISCUSIÓN África Centroamérica Sudamérica

CARACTERIZACIÓN DE CROMOSOMAS 8-hidroxiquinoleína  4h Sin tratamiento hipotónico 8-hidroxiquinoleína  2hCon tratamiento hipotónico RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Se determinó un protocolo para la observación de cromosomas de Vasconcellea × heilbornii que consistió de los siguientes pasos:Pretratamiento  8-hidroxiquinoleína (2mM), 2 h, 4oC.Fijación  Etanol-ácido propiónico (3:1), 24 h, 4oC.Digestión enzimática  C elulasa (5%)/Pectinasa (1%), 2 h, 37 oC.Tratamiento hipotónico  KCl (75mM), 15 min, RT. Tinción  Aceto-orceína (1%). CONCLUSIONES

CONCLUSIONES Se determinó un número cromosómico de 2n=2x=18 para Vasconcellea × heilbornii, este número se ha mantenido dentro de este género, indicando una estabilidad aparente en la homología cromosómica.

A pesar de los esfuerzos por optimizar el protocolo para observación de cromosomas de Vasconcellea × heilbornii , no fue viable la medición de estos debido a su pequeño tamaño, se recomienda usar métodos alternativos como el cultivo celular y otros métodos de tinción para determinar las características morfológicas de los cromosomas. RECOMENDACIONES

AGRADECIMIENTOS Claudia Segovia Salcedo, Ph.D. Directora del Proyecto de Investigación Mónica Jadán, Ph.D. Jefa del Laboratorio de Cultivo de Tejidos VegetalesLigia Ayala, Ph.D.Directora del Proyecto de VasconcelleasTesistasLaboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales- Genética evolutiva y Conservación Amigas/osFamilia